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隨著AAV在臨床上的應(yīng)用越來越廣泛，了解它的質(zhì)量屬性對產(chǎn)品療效和安全性的影響變得很有必要。目前用于表征AAV的分析技術(shù)也有很多，其中包含離子交換色譜（IEX）、體積排阻色譜（SEC）、反相液相色譜（RPLC）和親水作用色譜（HILIC）等的色譜方法被越來越多地應(yīng)用起來。以下是四種表征AAV的色譜分析策略分享。

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圖1. 在Protein-Pak Hi Res Q?譜柱上分離AAV8空?殼和完整?殼混合物。20 mM Tris pH 9，NaCl在20 min內(nèi)從 0增加?300 mM，流速0.4 mL/min。a?c)進(jìn)樣6 μL。a) 260 nm處的TUV。b) 280 nm處的TUV。c)熒光檢測：激 發(fā)波?280 nm，發(fā)射波?350 nm。d)進(jìn)樣0.5 μL的熒光檢測結(jié)果。20 mM Tris pH 9，NaCl在20 min內(nèi)從50增加 ?250 mM，流速0.4 mL/min。

圖2. 使?優(yōu)化的AEX?法定量各種AAV8空?殼和完整?殼混合物中的空?殼百分?。

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圖3. 分別使用流速0.6 mL/min（2.5 μm顆粒，5分鐘分析時間，黑色曲線）的XBridge Premier GTx BEH SEC 450 ? 2.5 μm柱；和流速0.05 mL/min（5 μm顆粒，50分鐘分析時間，紅色曲線）的參考500 ?柱所獲得的AAV2（A）、AAV9（B）、AAV5-空（C）和AAV5-滿（D）SEC色譜圖的放大視圖。

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圖5. 使用以下兩款 LC 色譜柱分離AAV6、AAV7和AAV8 衣殼病毒蛋白(VP)所得的譜圖對比：(a) Waters ACQUITY UPLC Amide糖蛋白分析專用柱(300 ?, 1.7 μm, 2.1 mm × 150 mm)和(b)Waters ACQUITY BEH C4色譜柱(300 ?, 1.7 μm, 2.1 mm × 150 mm)。在λem = 280 nm 和λex = 348 nm 波長下監(jiān)測熒光強度(EU)，且所有樣品的熒光強度都經(jīng)過歸一化處理。FD的譜峰歸屬根據(jù)準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)測定結(jié)果做了確認(rèn)，標(biāo)示如下：Ox：氧化；P：磷酸化。

ACQUITY BEH Amide色譜柱、ACQUITY BEH C4色譜柱在相同的離子對試劑（0.1%TFA v/v），且單位時間流動相B的變化也相同（%B/min）條件下分離三種不同AAV血清型的衣殼蛋白。結(jié)果表明ACQUITY BEH Amide色譜柱可以更好地分離VP變體。